显微成像平台简介

无膜细胞器与细胞动力学教育部重点实验室成像平台全面聚焦超高分辨光学显微成像，为部重实验室、中国科学技术大学以及其他研究单位提供专业、高效的超高分辨率成像服务和图像分析处理相关的技术支撑服务。

目前该平台已拥有多台显微成像系统，主要包括去卷积显微镜两套（API DV Elite）、高分辨光谱成像显微镜一套 （LSM 880 with Fast Airyscan）、超高分辨率显微镜一套（Zeiss PALM）、晶格结构光谱照明显微镜一套（Zeiss lattice SIM）及激光层照荧光显微镜一套（Zeiss light sheet）等。

第一章    用户守则

1.    成像平台是重要的科研平台，凡入内者必须遵守平台相关规章制度。未经允许，不得随意进出成像平台操作间。

2.    新用户接受培训考核后方可操作各成像仪器。

3.    每台仪器的使用及预约规定不尽相同，如有不清楚之处请及时与仪器管理员联系。

4.    进入显微镜室请穿鞋套，实验结束后及时将实验用品复位，清洁实验台并做好登记。

5.    仪器使用中遇到异常情况必须及时主动通报管理员，切勿擅自处理。

6.    实验数据应放在指定的存储空间内，实验用本地硬盘只能暂时存储数据，数据转移后需及时清理。

7.    对违反实验室管理规定的用户，将在实验室大会上通报批评，如造成严重损失者将酌情相应处罚。

第二章    DV显微镜的预约及使用规定

1.    预约时间：提前3天预约，例如6号早上8点开始可以预约9号的（7:59之前预约无效），如6、7、8号的时间有空出时间也可以约，无效的预约可直接在预约本上划除。

2.    预约时长：原则上每天分成上午8:00-12:00,12:00-16/18:00,16/18:00-任意时间，不得跨时段预约使用。

3.    预约超时：预约时间已超半小时及以上，但未实际使用，本次预约无效，时间自动分配给其他有需要的人，需重新登记。

4.    取消预约：

    （1）提前半天（6 h）预估实验失败或者没时间使用的，需直接在本子上划掉，并在群里发布时间空出的消息。

    （2）前一个使用人使用完后，找不到后一个预约人时，或者找到了说不使用的（0.5 h内），请后面的预约人负责联系后续预约使用者或关闭显微镜，前一个人向管理员报备。一个月超过2次，取消一个月使用资格。

    （3）预约时间内察看了之后才发现不需要继续的，请在大实验室或qq群内询问有无显微镜使用需求，确定没有并且离后面预约的人使用超过1 h，需在本子上划掉，并整体关闭显微镜。如果是活细胞，第一组不行，第二皿还想继续看的，老DV请关闭lamp。这种情况一个月超过2次，取消一个月使用资格，所以请确保实验的成功率后再考虑预约，比如插空先快速观察免疫荧光染色是否成功。仪器需要大家共同维护，请大家互相督促。

5.    预约次数：每台每周最多2次，如果只想用某一台，不超过3次。如文章有补实验或者其他特殊的显微镜使用需要，请向姚老师、刘行老师发邮件申请，并告知实验室其他成员，以避免产生不必要的误解。

6.    使用登记：所有使用人员必须如实在登记表上进行登记，详细记录汞灯读数、使用时段及使用人姓名。如发现有任何异常，在登记表上记录异常情况，并第一时间通报管理员。

7.    数据存储：每三个月清理一次显微镜的硬盘数据，各类实验数据请大家及时做好备份。显微镜上连接有大存储容量的移动硬盘，请在自行备份的基础上同时备份到该公共硬盘上，以保障大家的数据安全。

8.    其他注意事项：

    （1）做好实验计划，尽可能连续使用荧光显微镜，使用间隔超过一个小时，请务必关闭氙灯，氙灯关闭半小时后才允许再次开启。

    （2）使用过程中切换镜头或者拆装片夹之前务必把镜头座旋到底部。

    （3）非常规实验使用了不常用的镜头或滤片（例如细胞迁移实验或大视野成像使用了40×镜头，FRET实验调换了滤片），实验结束后请及时复位，避免给其他人的实验造成困扰。

    （4）严禁干擦任何光学组件，培养基滴落镜头时可用擦净纸沾蒸馏水轻轻擦去，固体物质残留在镜头上需用吹气球吹去后再用擦净纸沾蒸馏水擦拭。

    （5）油镜镜头清洁：擦净纸放在镜头边缘吸掉大部分油后用100%的乙醇彻底清洁镜头，从中心开始顺时针扩大划圈擦拭。

第三章    超高分辨及光谱成像显微镜的预约及管理细则

1.    显微镜间的空调系统实行统一控制开关，经安装工程师根据显微镜操作需求，设定了恒温（21度）恒湿（低于60%）的操作环境，非经管理人员许可，任何人不可操作控制箱开关。

2.    本显微镜为高端、非常规实验所需显微成像设备，一律实行操作资格认证制度，只有获得操作资格的人员才能独立操作。首次使用前先跟随管理委员会的已有授权的人员观摩并指导操作三次以上，同时递交书面申请，经姚老师和管理委员会评估之后再审核操作流程授权独立操作资格。

3.    仪器使用人需严格按照操作规范按顺序开、关机，打开金属卤化物灯后至少需等30分钟后才可关机；使用完毕时，依次关闭金属卤化物灯、激光器、Zen软件及电脑，并需等待激光器冷却约5分钟，Argon激光器的风扇停转后，再按顺序关闭各组件电源开关。不能随意更改仪器参数设定，如有疑问请咨询仪器管理人员。

4.    本显微镜实行预约制度，需要使用者请提前三天在预约本上预约登记，并填写“光谱成像显微镜使用申请表”电子表单。若因故未能使用，请务必于前一日事先告知取消。若累计两次预约未使用且未向管理员报备者，停止使用权限2周。

5.    仪器使用人必须认真使用和爱护仪器设备。使用前后应检查显微镜是否正常，若发现异常应及时报告仪器管理员；使用过程中实验所产生的废物废液必须及时、妥善处理。实验结束后，按操作规程将显微镜复位，清理载物台，保持显微镜清洁和干燥。经管理员检查后，仪器使用人须严格按要求如实、详细登记并填写显微镜使用记录后方可离开。

6.    实验室设备原则上由实验室内部使用，在确保完成本实验室科研任务的前提下，外单位人员确需使用需取得实验室负责人同意，并在设备管理员及操作审核员的知情同意下，听从操作审核员（刘行老师）安排和使用。

7.    使用者不遵守或违反设备管理规定，有下列情况之一者，管理员将视情况报实验室负责人同意后给予取消使用资格、赔偿损失或全实验室通报批评等处罚。

    （1）使用不登记者(对于需要登记的仪器)；

    （2）发现异常不报告者；

    （3）造成重大事故者；

    （4）未取得操作资格而擅自使用者；

    （5）不按规定操作者。

8.    关于数据存储：每三个月清理一次硬盘数据，各类实验数据请大家及时做好备份留存。为避免显微镜病毒感染、保证仪器安全性，不得使用可移动硬盘导出实验数据，请选择更为安全的光盘刻录方式。

第四章    成像平台使用资格考核表（见下表）

第五章    成像平台违规处理办法

因显微镜属成像类仪器，需要激光器或汞灯作为光源，来激发捕获数据图像。因此根据光源的使用特性和使用寿命损耗情况，这类仪器有其特定的操作规定：

1.    预约及使用中，需严格遵守仪器开关机时间间隔要求，所有使用人必须在登记本上如实登记氙灯读数、使用起止时间及使用人姓名等相关信息；

2.    保持平台间清洁，将样片玻片上下表面清理干燥洁净后再用显微镜观察，不得让实验样品溶液污染显微镜；

3.    浪费镜头油容易造成镜头污染发霉损坏，后续实验人发现镜头未清理干净的需及时通报管理员追责，否则自行承担清洁工作。如有违反，管理员追究最后使用人责任，发现即日起负责显微镜间公共卫生1周；

4.    有独立操作权限的人员在实验结束后，应及时清理油镜、物镜台复位、关闭激光器、关机；活细胞实验之前需将过滤瓶装MilliQ纯水灭菌，实验结束后清洁过滤瓶并确保晾干，防止引起连接管发霉污染样品；

5.    使用完仪器离开显微镜室请确保仪器不能空开，如后续有预约登记使用仪器，必须等来人接手仪器后才能离开；

6.    无独立操作权限的人员不能自行操作仪器的开闭，不要自己清理物镜；

7.    使用中发现任何异常需第一时间报告仪器管理员，并及时登记故障信息；

8.    其他违规操作，根据情况酌情处理。

违反以上操作规定，将暂停个人仪器预约及使用资格2周，经报实验室负责人后全实验室通报批评。如造成仪器损坏或隐患者，需向实验室负责人提交《仪器使用违规使用说明》，由负责人签字确认，并将根据维修情况按比例承担仪器维修费用或取消当季度绩效发放。